流式技術自誕生以來,已逐漸成為生物學、醫學以及藥物研發等領域中不可替代的分析檢測手段。傳統流式細胞技術以熒光基團作為待測抗體的標記物,在檢測過程中特別是多參數檢測過程中勢必難以突破熒光重疊的瓶頸,因而限制了檢測通量以及由此產生的一系列應用中的問題。
Fluidigm公司基于“Time-of-flight”的質譜流式Helios系統(CyTOF),利用金屬元素取代熒光基團作為標記物,從根本原理上解決了這一問題,正以其展現出的強大的創新能力,為人類健康與疾病的研究帶來前所未有的突破。
1.設計原理:
區別于市場上常見的流式細胞儀,質譜流式技術采用非放射性的重金屬同位素作為抗體的標簽,在經過抗體孵育后,細胞被逐個送入等離子炬中進行離子化,使標簽金屬離子得以釋放并被進一步送入飛行時間檢測室(time-of-flight chamber)中進行檢測,檢測器會精確記錄設計并換算為各種標簽同位素的精確含量,并通過適配軟件分析輸出數據。
傳統流式熒光基團發射光譜圖
質譜流式原子質量譜圖
2.儀器特點:
基于這一設計原理,Helios質譜流式系統相較于傳統方法:
1.信號精確:
高純度的非放射性金屬同位素確保了最低的背景噪音;并且不存在傳統方法中熒光重疊的問題,無需進行補償操作,準確客觀地反應數據。
1.拓展了檢測通道數:
目前利用Helios質譜流式細胞儀可同時檢測40種以上的標記物,同時該技術將檢測通道數量擴展到135個,為進一步加入新標簽(標記物)做好了準備,充分滿足對生物樣本全面分析的要求。
2.設計方案靈活:
檢測通道數的增加不僅僅擴大了是通量,更重要的是是實驗設計更加靈活和完善,通過對細胞表面標記物和內部信號因子的全方位分析,可以幫助科研人員更加精確地進行細胞亞群分析,尋找那些重要的或稀有的未知亞群。
3.研究不再“盲人摸象”:
正是基于質譜流式細胞儀這些創新的技術原理和特點,賦予了其更加強大的生命力,為研究人員的課題設計和執行提供了更多的可能性,除了流式應用中常見的細胞表面標志物檢測和免疫學研究等領域,還涉及到了細胞生物學的方方面面,無論從深度、廣度還是全面性上都有了大幅的提高,確保了數據的完整性。
4.抗體服務及專業技術支持:
Fluidigm公司目前可以為用戶提供幾百種金屬預標記抗體以及一系列針對具體應用的Panel 試劑盒,這些試劑可以結合組成更大的Panel,對細胞系統進行深入的分析。為了更好地滿足用戶使用需求,還可提供抗體的個性化定制和標記服務。
同時,公司還為客戶提供全套的培訓和支持計劃,使客戶能夠快速掌握Helios質譜流式技術要領和使用方法,全身心投入相關領域的研究工作。
通過獨創的金屬標簽抗體,標記細胞表面及胞內蛋白,實現單細胞的多參數分析。
• 135 個檢測通道,可同時分析40 種以上的標記物。
• 金屬標簽種類多,并具有類似的靈敏度,互相之間沒有“串色”,實驗設計更加靈活;
• 目前已標記的抗體庫中有超過600 種抗體,另外還可根據實驗需要利用高效穩定的金屬標記試劑盒,對抗體進行個性化標記,為您的實驗提供更多的可能性。
• 抗體目錄不斷增加
• 基于“云”的Cytobank 系統,極大的降低了數據分析的門檻,可以方便的使
用SPADE、viSNE 等高級數據處理方法。通道多,可實現40 種以上蛋白的同時檢測,從少量樣本獲取大量有效數據信息。
• 配套多種降維、聚類數據處理方法,可對樣本亞群構成、信號通路等進行深入分析。
• 簡單易用,儀器自動校準,無需對各個通道進行逐一的補償校正、電壓調節步驟。各種細胞表面標志物的分析CD 分子、主要細胞標志物、干細胞標志物
• 免疫學分析
TCR 抗原表位、細胞因子產生、功能表現型的分析
• 細胞內信號通路分析
探索磷酸化激酶、標記分子和抑制劑
• 細胞周期研究
DNA 合成、細胞周期調控因子、細胞增殖
標志物
• 細胞凋亡研究
Bad、Bax、Bcl2、Caspases 等細胞凋亡
相關分子
• 精細的亞群分析
研究外周血、骨髓、腫瘤等樣本的亞群組成