用途

PCR

說明

該產品是以改良型KOD DNA polymerase（UKOD）為基礎開發的PCR用2× Master Mix，兼具保真性好和擴增效率高的特點。

使用改進的延伸增強劑技術，可以實現超高速PCR反應:長度在1kb以內的片段僅需1秒， 1~10kb時延伸速度為5秒/kb，10kb及以上延伸速度為10秒/kb。該酶具有很高的反應成功率，針對含肌苷(dI)或尿嘧啶(dU)的引物模板或者粗體樣品都能很好地進行擴增。此外，因為預添加了抑制酶活性和3`5`外切酶活性的單抗，可以進行高特異性的熱啟動PCR。

特征

●高速PCR

●簡便

除了引物和模板之外的PCR組分都包含在預混液中，簡化了配液流程，同時也提高了實驗的可重復性。此外，包含電泳指示劑的KOD One^TM PCR Master Mix –Blue-(Code No. KMM-201)可以在PCR反應完成后直接點樣，無需另外添加Loading Dye。

●超高的保真性
保真性約為Taq DNA 聚合酶的80倍，保持了KOD系列產品中保真性最高的水準

●粗樣品也可高效擴增（實驗例2）

●可以使用含肌苷(dI)或尿嘧啶(dU)的引物和模板（實驗例5）

實驗例

1. 高速PCR實驗

以人基因組DNA為模板，可進行超快速PCR擴增。結果顯示，KOD One^TMPCR Master Mix及KOD One^TMPCR Master Mix -Blue-擴增1kb以下的目的片段時延伸時間設為1 sec.，1 ~10 kb的目的片段時按5 sec./ kb設定可以得到清晰的擴增條帶。

2.粗樣品擴增

使用KOD One^TMPCR Master Mix，比較從血液、鼠尾裂解液（堿裂解液）分別擴增人β-globin基因和小鼠Thy-1基因結果。反應根據各PCR酶推薦條件進行，延伸時間5 sec./ kb。

結果顯示，只有KOD One^TMPCR Master Mix能夠得到明確的條帶。

3.逆轉錄反應液（cDNA）的添加量對擴增的影響

逆轉錄反應液中殘留的RNA對PCR有抑制作用，過量添加cDNA模板會使擴增效果變差。KOD One^TMPCR Master Mix不易受RNA的抑制作用。為了確認可引入的cDNA的量，通過加入不同量的cDNA模板，檢測擴增TFR基因的效果。與原來的產品及其他公司的產品相比，即使添加較多的cDNA也能得到良好的擴增。

產品內容

【KMM-101】
Master Mix                1mL ×5支
【KMM-201】
Master Mix（含染料）     1mL ×5支

基本反應條件

滅菌蒸餾水X μl
KOD One PCR Maaster Mix25μl
各引物15pmoles each
模板1～50ng(Plasmid)
10～200ng(Genome DNA)
～750ng[RNA相當](cDNA)
～5μl(粗樣品)

Total Volume50μl

〈2步法循環〉*
98℃ 10sec.
68℃ 5~10sec./kb 25～45 cycles

〈3步法循環〉*
98℃ 10sec.
(Tm-5)℃ 5sec.
68℃ 1~10sec./kb 25～45 cycles

延伸時間請根據片段長度進行設定：
1～10 kb:5 sec./ kb
10 kb～:10 sec./ kb

〈Step down循環〉*
98℃, 10sec.
74℃, 1~10sec./kb 5 cycles
↓
98℃, 10sec.
72℃, 1~10sec./kb 5 cycles
↓
98℃, 10sec.
70℃, 1~10sec./kb 5 cycles
↓
98℃, 10sec.
68℃, 1~10sec./kb 15～25 cycles


*基本上以2步法循環進行。引物的Tm值低于68℃或用2步法循環未見擴增時，請試一下3步法循環。另外，擴增10kb以上的目的片段時，如果出現Long PCR片段或非特異條帶及彌散，請試一下Step down循環。 ※Tm值采用最鄰近法（Nearest Neighbor method）計算得到的值。
引物的Tm值以及擴增產物的Tm值計算請點擊此處進入在線工具