用途

PCR

說明

本產品是以KOD DNA polymerase為基礎開發的高保真性

PCR用酶。在本公司的PCR酶中保真性最高。本酶通過

對Buffer組分的改良及采用熱啟動方法，與原來的產品

KOD DNA polymerase相比，保真性、PCR效率有了

非常顯著的提升。KOD -Plus- Ver.2由于對KOD -Plus-

的Buffer進行了進一步的改良，PCR成功率更高。

特征

●優良的保真性（本公司同類產品中為第一）

KOD DNA polymerase的特點是具有非常高的保真性，而KOD –Plus-的保真性有了更大的提高。大約為Taq DNA polymerase的80倍。最適用于克隆。

●通過熱啟動提高了PCR反應效率
通過將2種抗KOD單克隆抗體預混在酶中，抑制了常溫狀態下的多聚酶活性（該活性是產生非特異性反應的主要原因）和3'→5'核酸外切酶活性?？贵w在PCR的預變性步驟即發生失活，對擴增反應沒有任何影響。

●延伸性?擴增效率的提高
對反應Buffer的組分進行了優化，使之較以往的KOD DNA Polymerase延伸性?擴增效率均有很大的提高。

●超群的耐熱性
因其耐熱性比Taq DNA Polymerase更為優良，故可以將熱變性步驟的溫度設定值提高，對GC含量高，容易形成高級結構的目的片段尤其適用。

●高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】
對難擴增的目的片段、長目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外，也降低了帶入的逆轉錄反應液對PCR反應的抑制。

產品內容

【KOD-201】
KOD -Plus-(1U/μl)*200μl ×1支
10×PCR Buffer [KOD-2B]1.0ml ×1支
25mM MgSO₄ [KOD-2S]1.0ml ×1支
2mM dNTPs [NTP-201]1.0ml ×1支

【KOD-211】
KOD -Plus-(1U/μl)*200μl ×1支
10× PCR Buffer [KOD-3B]1.0ml ×1支
25mM MgSO₄ [KOD-2S]1.0ml ×1支
2mM dNTPs [NTP-201]1.0ml ×1支

*含有1.6μg/μl 濃度的KOD抗體。

組分:
50mM   Tris-HCl(pH8.0)
0.1mM  EDTA
1mM     DTT
50%      Glycerol
0.001%  Tween^® 20
0.001%  Nonidet^® P-40

活性的定義:
在75℃活性測定條件下，在30分鐘內攝入10nmoles的全核苷酸使成為酸不溶物時所需酶的活性定義為1U。

來源:
E.coli 重組體

基本反應條件

〈KOD -Plus-〉
10×PCR Buffer(KOD -Plus-用)5μl
25mM MgSO₄2μl(1mM)
各Primer15pmoles each
2mM dNTPs5μl(0.2mM)
模板1?50ng(Plasmid)
10?200ng(Genomic DNA)
?1μl(逆轉錄反應液)
KOD -Plus-(1U/μl)1μl(1U)

Total Volume50μl

< 3 Step Cycle >^*
94℃        2min.
        ↓
94℃        15sec.
Tm-5℃    30sec.

68℃    1min./kb    25?35 cycles

< 2 Step Cycle >^*
94℃        2min.
        ↓
94℃        15sec.

68℃        1min./kb    25?35 cycles

〈KOD -Plus- Ver.2〉
10×PCR Buffer(KOD -Plus- Ver.2用)5μl
25mM MgSO₄3μl(1.5mM)
各Primer15pmoles each
2mM dNTPs5μl(0.2mM)
模板1?50ng(Plasmid)
10?200ng(Genome DNA)
?2μl(逆轉錄反應液)
KOD -Plus-(1U/μl)1μl(1U)

Total Volume50μl

< 3 Step Cycle >^*　　　
94℃        2min.
        ↓
98℃        10sec.
Tm-5℃    30sec.

68℃        1min./kb    25?40 cycles

< 2 Step Cycle >^*
94℃        2min.
        ↓
98℃        10sec.

68℃        1min./kb    25?40 cycles

*通常用3步法進行擴增。

引物的Tm值在72℃以上時，如果用3步法循環出現smear現象，改用2步法循環有時會改善。

※Tm值采用最鄰近法(Nearest Neighbor method)計算得到的值。引物的Tm值以及擴增產物的Tm值計算請點擊此處進入在線工具