用途

Realtime PCR

說明

KOD SYBR^® qPCR Mix是使用KOD DNA polymerase（KOD）的SYBR^® GreenⅠ檢測體系進行熒光定量PCR的Master mix。由于KOD SYBR qPCR Mix是去除了3’→5’核酸外切酶活性（校正活性）的KOD exo（−）DNA polymerase和最適化buffer的組合、最大程度發揮了KOD的『高效合成能力』以及『不易受到粗樣品的抑制』的特性，可穩定地用于各種用途的熒光定量PCR。 

引物的Tm值以及擴增產物的Tm值計算

特征

對GC含量高的目的片段很有效

對于GC含量70%以上，用以往產品難以擴增的目的片段，也可定量擴增。

圖2. GC含量不均一的啟動子區域的Realtime PCR(使用ABI StepOnePlus^TM)
已確認本試劑對易于形成二級結構的目的片段也能有效擴增。

可擴增長鏈目的片段（?2kb）
KOD FX以及KOD-Plus-系列等通常用于PCR的引物可直接使用。由于長鏈目的片段也可擴增，擴大了引物的選擇范圍。

2kb以內的各種長度目的片段均可選擇，因此可在大范圍內進行融解曲線分析?？梢赃x擇引物二聚體的產生范圍以外的擴增區域（短鏈區域），對于用end point法進行的多重分析、multiplex PCR有很好的效果。

適用于粗樣品的分析
用植物裂解液、鼠尾堿裂解液等粗樣品可直接檢測。運用SYBR^®Green Ⅰ檢測法，能簡化繁瑣復雜的多型分析及SNP分析。
①擴增長度不同的基因分型檢測
通過改變兩種擴增產物的擴增長度，只需引物的Tm值設計成不同，即可在單管中進行mouse tail的基因分型。（參照上一個特征）。

圖6.從血液及口腔粘膜的檢測(用ABI 7500 Fast)
(A) 表示ALDH2 SNP檢測用引物。為了能在一管中進行基因型的分辨，引物設計時，在一條等位基因特異的引物上加了GC tail (下劃線部分)，使擴增產物的融解溫度（Tm值）產生差異。GC tail的添加使得融解溫度大幅度上升，使用擴增長度在100bp以下。另外，該實驗例中，將等位基因特異的引物3’端開始第2位堿基設為SNP位點(紅色)、第3位堿基設計了錯配(綠色)位點。
(B) 向20μl反應體系中添加5μl血液的稀釋液或口腔粘膜的懸濁液，進行檢測。結果顯示，可以判定基因型。

③使用粗樣品進行檢測
對于用以往使用Taq DNA polymerase的PCR試劑難以擴增的粗樣品也可以進行檢測分析。

高特異性
通過抑制引物二聚體等非特異性反應，在低拷貝區域也可進行廣泛的定量檢測。同時通過使用本公司熒光定量PCR用cDNA合成試劑盒「ReverTra Ace^® qPCR RT系列」，可以進行穩定的檢測。

適用于各種儀器
除了模塊型儀器（也適用于Fast Mode），也適用于使用毛細管的高速循環儀。另外，由于另附了50×ROX reference dye，對需要passive reference的儀器也可以使用，適用于各種儀器的ROX濃度。
  【可以使用的儀器例】