PCR
本品為含有Taq DNA Polymerase的2×Master Mix(可進行熱啟動、并加入了電泳染料)。
只要加入模板DNA及引物,即可進行PCR,反應產物可直接進行電泳分析。
預先將Taq抗體加入到Master Mix中,通過熱啟動效果,可進行高特異性、高效率擴增。
●2×Pre Mix(添加染料)
本品為2×Master Mix,只需要加入模板和引物,即可方便地使用。由于預混了染料(BPB),PCR后可直接用于電泳上樣。
●優良的PCR性能
通過使用優化的Buffer組分及高純度的Taq DNA polymerase,與原來的Taq DNA polymerase相比,PCR性能有了大幅度提高。
●采用熱啟動PCR
采用使用抗Taq DNA polymerase抗體的熱啟動法,顯示了高靈敏和高特異性。
●保存穩定性高
經驗證,反復凍融30次、4℃狀態下保存3個月對品質沒有影響。
1.使用直接克隆PCR進行插入片段的檢測
用含有500bp插入片段的質粒pTA2進行轉化大腸桿菌DH5α,以得到的克隆為樣品,在載體上設計引物進行PCR。
結果顯示,可以得到跟插入片段長度相同的明亮的條帶。
由此可見,使用本品進行直接克隆PCR,也可以得到良好的結果。
2.人p53基因(2.9 kb)的擴增
以人基因組DNA(50ng)為模板,以較難擴增的人p53基因(2.9kb)為目的片段進行擴增。結果可見,使用Quick Taq HS Dye Mix可得到最高效率和最高特異性。另外,可知在不采用熱啟動法的情況下(3、4泳道),特異性及靈敏度都很低(Quick Taq HS Dye Mix采用熱啟動法)。
3.各種條件下擴增效率的比較
以人基因組DNA (50ng)及大腸桿菌菌落為模板,擴增人的β-globin基因(1.3kb, 3.6kb)、及質粒插入片段(3.9kb)。
反應分別按各試劑的最適條件進行。
結果顯示,使用Quick Taq HS Dye Mix時,可進行高效率且高特異性地擴增。
產品內容
Quick Taq HS Dye Mix1.25ml×2管
※50μl反應體系,可使用100次。
組分如下:
rTaq DNA Polymerase
抗Taq酶的抗體
dNTPs
電泳染料(BPB)
Reaction Buffer
基本反應條件
滅菌蒸餾水Xμl
2×Quick Taq HS Dye Mix25μl
10pmol /μl Primer F1.0μl
10pmol /μl Primer R1.0μl
Genomic DNA(50ng/μl) ~200ng
Plasmid DNA ~50ng
菌落(※請參考實驗例)
Total Volume50μl
< 2步法循環>*
94℃ 2min.
↓
94℃ 30sec.
68℃ 1min./kb 25~40 cycles
< 3步法循環>*
94℃ 2min.
↓
94℃ 30sec.
(Tm-5)℃ 30sec.
68℃ 1min./kb 25~40 cycles
*引物的Tm值低于73℃時,推薦使用3步法循環。