Ligation high

用途

DNA連接

說明

本試劑是以T4 DNA Ligase為主體的高效率單管型連接試劑，廣泛應用于各種末端DNA的連接反應。通過組分條件的優化，使之對凍結/融解的穩定性和反應效率大大提高。是含有連接反應所需要的rATP?DTT等的單管連接試劑。使用時只需按DNA樣品溶液的1/2?同等量加入Ligation high，就可以得到比單獨使用T4 DNA Ligase更好的結果。

特征

●簡便
只需在DNA樣品中混入Ligation high，便可進行高效率的連接反應。

●高效率
與單獨使用T4 DNA Ligase相比，可獲得50倍以上的效率。

●高穩定性
經實驗確認，即使反復凍融50次，也不會降低連接反應的效率。

實驗例

1.反復凍融時的穩定性

凍融后，按推薦說明書進行連接反應。結果表明：即使反復凍融50次，也不會降低連接反應的效率。

2. 鹽濃度的影響

本實驗探討DNA溶液中所含的鹽（NaCl）濃度對連接效率的影響。
將用SacⅠ切斷的pBluescript^®Ⅱ（5ng）混入不同鹽濃度的TE Buffer 5μl中，以觀察DNA溶液中所含的鹽成分對自連接效率有多大影響。方法如下：在DNA 片段溶液中添加與其等量或一半量的Ligation high，16℃條件下反應30min.，取2μl用于轉化，檢測出現的菌落數。
結果顯示，NaCl濃度越高，連接反應效率越低。
因此，對溶解在限制酶H Buffer等高鹽濃度反應液的DNA用于連接反應時，建議先置換成TE buffer。

3.反應時間對PCR產物TA克隆的影響

使用本試劑，將PCR產物插入到T載體中，觀察反應時間對實驗的影響。實驗方法如下：先以λDNA 500bp為目的片段，用rTaq DNA Polymerase進行。將該反應液1μl (約6.4ng)和2μl的T載體(50ng)添加到3μl的Ligation high中，在16℃條件下進行不同時間的溫育，再進行連接反應。然后再用各反應液2μl進行大腸桿菌轉化，測定白斑和藍斑的數量。
結果顯示，反應時間越長，效率越高，16小時效果最好。2小時以上，藍斑的數量沒有明顯變化，而時間越長白斑的數量越多。因此，用Ligation high進行PCR產物的TA克隆時，如想要獲得高插入率，建議反應時間在2小時以上，最好是16小時。