用途

●普通的TA克隆「TArget Clone^TM」
●KOD系列擴增得到的平滑末端產物的TA克隆「TArget Clone^TM-Plus-」
●對KOD系列擴增得到的平滑末端產物進行加dA反應「10×A-attachment Mix」

說明

特征

●快速?高效率
連接反應最快可在5分鐘內完成。

●可靠
載體中有LacZ，可進行藍白斑篩選。

●方便
在多克隆位點的兩端帶有轉錄用的啟動子(T7、T3)，可用于轉錄產物的配制。

●可用于平滑末端PCR產物《TArget Clone -Plus-》
在TA克隆試劑盒中添附了『A-attachment Mix』，使用更方便，是KOD系列專用的TA克隆試劑盒。平滑末端PCR產物無需純化，將其與『A-attachment Mix』混合，只需10分鐘即可完成加dA反應。

實驗例

使用各類PCR產物比較TA克隆的效率用高保真性酶KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2及Blend Taq，對來自human genome的β-globin基因0.5kb進行PCR擴增。分別用TArget Clone以及TArget Clone^TM -Plus-對未經純化的PCR產物進行TA克隆，連接到pTA2 載體。結果可見，對KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2的擴增產物進行克隆時，使用TArget Clone^TM -Plus-，克隆效率可得到大幅度提高。

另一方面對Blend Taq的擴增產物進行克隆時，用TArget Clone^TM -Plus-相比，雖然效率有很大下降，但是使用TArget Clone也可以高效率地進行TA克隆。

【TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
【TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
10×A-attachment Mix 10μl　

基本反應條件

「TArget Clone」^TM

滅菌蒸餾水(3-X)μl

2×Ligation Buffer 5μl

pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

PCR產物Xμl

T4 DNA Ligase 1μl

Total Volume 10μl

室溫(15～25℃)、30min.

「TArget Clone^TM -Plus-」

KOD酶擴增的PCR產物 9μl

10×A-attachment Mix 1μl

Total Volume 10μl

60℃、10min.

↓

滅菌蒸餾水(3-X)μl

2×Ligation Buffer 5μl

pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

上述處理后的PCR產物Xμl

T4 DNA Ligase 1μl

Total Volume 10μl

室溫(15～25℃)、30min.