Ligation high Ver.2

用途

DNA連接

說明

本試劑是以T4 DNA Ligase為主體的高效率單管型連接試劑，廣泛應用于各種末端DNA的連接反應。通過對原產品進行改良，可簡便地用于各種用途。本試劑是在原產品『Ligation high』基礎上改良的使用更方便的高效率單管型連接試劑。只需與DNA片段混合，進行短時間反應，即可高效率地進行連接?？蓮V泛用于突出末端、平滑末端及TA克隆等方面。

特征

●高效率
特別是TA克隆效率得到了大幅度的提高。下圖是用各公司試劑盒對TA克隆效率的比較。

●即使在-20℃保存也不會凍結
從冷凍柜中取出后可立即使用。右圖表示-20℃保存時試劑的狀態[原來的產品:Ligation high〈綠〉、本產品:Ligation high Ver.2〈藍〉]。

●簡便的單管型

使用方法與原有產品一樣，只要將試劑和DNA片段混合即可，非常簡便。

實驗例

1.DNA末端形狀與連接效率的關系

在16℃條件下反應時，將DNA片段（0.5kb）的克隆效率與末端形狀進行比較。結果可見，突出末端的連接約5分鐘即可完成，而平滑末端及TA克隆30分鐘約完成70?80%。另外，平滑末端克隆及TA克隆時間超過1小時，到2小時為止，連接效率會逐漸提高。因此當克隆效率比較低時，可將反應時間提高至2小時左右可提高連接效率。

2.使用未經純化的PCR產物的TA克隆

將T載體（50ng, 25fmol）和具有良好擴增效率的未純化PCR產物（用Taq DNA polymerase擴增的0.5kb片段）按照各種比例混合，在該DNA溶液〈7.5μl〉中添加Ligation high Ver.2〈7.5μl〉，在16℃條件下反應30分鐘。然后，用10μl反應液對E. coli DH5α感受態細胞〈100μl〉進行轉化，用LB/Amp（X-Gal）培養基培養后點克隆數。結果可見，盡量少帶入PCR反應液可得到良好的結果?！∮捎谟眉兓蟮腄NA片段可得到高效率，因此當效率低下時，可使用純化后的PCR產物。