用途

Realtime PCR

說明

本產品是在 Taq DNA polymerase 基礎上開發的通用性很高的Realtime PCR 用 2×濃度的預混液?？色@得重復性良好的結果。

各試劑分別按以下所示進行使用。

*逆轉錄酶「ReverTra Ace®」[Code No. TRT-101]與RNase inhibitor [Code No. SIN-201] 組合，就可以進行one-step PCR。
**可用于TaqMan® probe分析法及Hybridization probe分析法等。

特征

●高特異性
為了抑制非特異性反應，本產品采用了抗Taq聚合酶抗體的熱啟動法。

●適用于各種用途
可用于探針分析法及SYBR^®Green I分析法。

●適用于各類儀器
產品中還添加了 Passive Reference，可應用于需要校正的儀器（Applied Biosystems^®、StepOnePlus^TM等）。
還可用于使用玻璃毛細管類型的檢測儀器（Roche Diagnostics公司的LightCycler^®等）。

●提高了可靠性[SYBR^®Green Realtime PCR Master Mix -Plus-(QPK-212)]
通過對組分的最優化，抑制了SYBR^®Green 分析時引物二聚體等問題的產生，提高了可靠性和重復性。

●使用了高純度Taq DNA polymerase
PCR的基本性能得到了改善。

實驗例

1. SYBR^®Green 分析體系與其他公司產品的反應性能比較
本例將SYBR^®Green 分析體系與其他公司產品的反應性能進行了比較。首先將人的基因組DNA各作10倍梯度稀釋（從30ng到3pg的5個梯度），以稀釋液為樣品進行PCR，擴增β-actin基因。結果顯示，使用本產品時，在擴增效率及起峰早晚方面有顯著優勢。另外，引物二聚體的產生也不明顯。
（儀器：使用BioFlux公司的LineGene）

2. 相關性分析的討論
使用本公司的逆轉錄試劑盒ReverTra Ace -α-^®，以HeLa細胞來源的Total RNA(100ng)為模板，使用random primer合成1st strand cDNA之后，稀釋10倍后作為標準品，各作5倍梯度稀釋，檢測β-actin基因。結果顯示，所有濃度都得到了良好的擴增曲線。
（使用Roche公司的LightCycler^TM）

3. 與其他公司產品性能的比較【相關性】
嚙齒類動物來源的基因組DNA（以10倍稀釋系列：10ng、1ng、0.1ng、0.01ng(n=2)）為模板，通過相關性分析進行目的基因（約80bp）的檢測。結果顯示，A公司的試劑產生了非特異性擴增及引物二聚體，但用SYBR^®Green Realtime PCR Master Mix -Plus-卻得到了良好的擴增。另外，Ct值的間隔也是相等的，可定量擴增區域也非常廣。
（儀器：使用BioFlux公司的LineGene）

4. TaqMan^®法的應用
使用本公司的逆轉錄試劑盒ReverTra Ace -α-^®，以HeLa細胞來源的Total RNA(100ng)為模板，使用random primer合成1st strand cDNA之后，稀釋10倍后作為標準品，各作5倍梯度稀釋，使用Applied Biosystems公司的Pre-Developed TaqMan^®Assay Reagents對β-actin進行TaqMan^®法檢測。結果顯示，所有濃度都得到了良好的擴增曲線。沒有擴增的曲線是空白對照（蒸餾水）。
（儀器:使用ABI PRISM^®7700）

產品內容

【QPK-101,QPK-201】
Master Mix1ml ×5支
(50μl反應200次份、20μl反應500次份)

【QPK-212】
Master Mix1ml ×5支
Plus solution1ml ×1支
(50μl反應200次份、20μl反應500次份)

注意事項

關于PCR相關產品的標簽許可事項，請瀏覽本公司的網站(www.bio-toyobo.cn) [PCR相關產品角]。

基本反應條件

〈SYBR^® Green I 法〉
滅菌水Xμl
Master Mix25μl
各Primer10pmoles each～
DNA樣品Yμl

Total Volume50μl

Cycle
95℃    60sec.
       ↓
95℃    15sec.
55～65℃    15sec. 40cycles
72℃    45sec.
※退火溫度，請根據引物的Tm在55～65℃之間進行調整。
※延伸反應時間，只要擴增長度在200bp左右，設定為45sec就可以。