用途

RT-PCR用cDNA的合成

說明

本試劑盒使用的逆轉錄酶ReverTra Ace^®屬于在高溫反應性和反應效率方面進行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH^-)，與以往的RTase相比，可以合成更長的cDNA(已確認到可以合成cDNA長度最長可達14kb)。

特征

●高效率

使用高效率逆轉錄酶「ReverTra Ace^®」，可以高效率地合成cDNA。

●應用范圍廣

可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各種逆轉錄情況。

●確證

因含有陽性對照（positive control）,可在確證各步驟的同時推進實驗進展。

實驗例

使用ReverTra Ace -α-^®以HeLa Total RNA(1μg)為模板，進行cDNA的合成后，使用各種PCR酶，以β-actin(838bp)為目的片段進行PCR反應。cDNA合成反應是在20μl的反應體系中，42℃下反應20min.，接著99℃進行5min的失活處理。然后，向合成的cDNA反應液中加入80μl的PCR溶液，使總體系達100μl，進行PCR反應。

結果顯示，所有的酶都確認有擴增，ReverTra Ace -α-^®的逆轉錄產物可適用于各種PCR酶的擴增反應。

產品內容

ReverTra Ace^®100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
Random Primer〔FSK-301〕100μl
Oligo(dT)₂₀ Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
RNase Inhibitor100μl
RNase Free H2O1.2ml


*5×RT Buffer與ReverTra^® Ace用的Buffer組分相同。

基本反應條件

〈cDNA合成〉
滅菌蒸餾水Xμl
模板RNA
100-1000ng total RNA
10-100ng mRNA
Primer
1μl Oligo(dT)20 Primer
1μl Random Primer
10pmoles* Specific Primer
5×RT Buffer4μl
10mM dNTPs2μl
ReverTra Ace^®1μl
RNase Inhibitor1μl

Total Volume20μl